大肠杆菌培养

大肠杆菌是我们肠道里面的杆菌，这是一种很常见的杆菌，对于我们人体的健康是可谓是一把双刃剑，在不致病的情况下(正常状况下)，可认为是互利共生(一般高中阶段认为是这种关系)；在致病的情况下，可认为是寄生，而致病的话常常容易导致严重的腹泻和败血症，那么，大肠杆菌培养是怎么回事？针对这个问题我们来详细了解吧！大肠杆菌的培养1.LB培养基配制(液体培养基)① 取1L的烧杯，加入适量的一蒸水(<1000ml)，称取胰蛋白胨 10g ，酵母提取物 5g ， Nacl 10 g 倒入烧杯中② 加入磁子搅拌，至完全溶解③ 用NaoH调PH=7.0，定容至1L④ 分装后高压蒸汽灭菌(固体培养基)① 在液体培养基的基础上加入琼脂糖：1L液体培养基→15g琼脂糖(用水先溶解)② 在电炉子上边加热边搅拌至煮沸溶解③ 分装后高压灭菌注意事项① 电炉子温度不要太高，烧杯直接加热时电炉子上要加石棉网高压灭菌时，瓶盖上要插上针头，防止灭菌时瓶盖喷出2.倒平板培养皿要提前进行灭菌、烘干，在超净工作台里，打开酒精灯，在酒精灯的火焰旁进行操作，倒完后做好标记3.接种(平板划线分离法)接种环挑取大肠杆菌进行接种：图式：注意：每次划线前接种环都要灼烧灭菌，再冷却。4.37°恒温培养箱培养接种好的培养皿正置15分钟，然后倒置放入培养箱过夜培养大肠杆菌感受态的制备及转化感受态细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。一、制备步骤从大肠杆菌DH5α的培养平板上挑取一个单菌落接于2mL LB液体培养基的试管中，37℃振荡培养过夜。↓1%的接种量将以上过夜培养物接种于液体培养基中↓37℃振荡培养2\～3h↓将菌液转移到50mL离心管中，冰上放置10min↓4000rpm，离心10min回收细胞↓倒出培养液，将管倒置1min以便培养液流尽↓用冰冷的0.1mol/L CaCl2CaCl_{2}CaCl2​ 10mL，悬浮沉淀↓立即放在冰上保温30min↓4℃，4000rpm，离心10min，回收细胞↓用冰冷的0.1mol/L CaCl2CaCl_{2}CaCl2​ 2mL悬浮细胞(务必放冰上)↓分装细胞，每200μl一份。此细胞为感受态细胞。二、转化步骤：200μl新鲜配制的感受态细胞中加入质粒 DNA2μl(≤50ng)，混匀同时做以下对照管(受体菌对照：200μl感受态细菌+2μl无菌水 质粒对照：200μl 0.1mol/L CaCl2CaCl_{2}CaCl2​ 溶液+2μl质粒)↓冰上放置30min↓将管放到42℃循环水浴热冲击90s↓取出，迅速冰浴2min↓每管加800μl LB液体培养基，37℃慢摇复苏1h↓取50μl已转化的感受态细胞或对照样品，各分别涂在含有或不含有氨苄青霉素的培养皿中↓待吸干菌液后，倒置培养皿，于37℃培养过夜↓次日在含氨苄青霉素的培养皿上长的菌落即为含有质粒的大肠杆菌(即转化成功)【温馨提醒】对于人体而言，当身体免疫力降低的时候，才比较容易感染到大肠杆菌这一病毒。大肠杆菌必须尽早治疗，以免日后给生命健康带来隐患。（责编：付子颜 ）